Al igual que muchos de los juegos de Tecmo Koei, en NiOh muchos de los personajes tienen un origen histórico y la mayoría de los que veremos en este juego sirvieron bajo el Oda Nobunaga durante el Sengoku Jidai. Aquí, además de a su
protagonista principal, William, también vamos a ver a muchos personajes históricos reflejados de forma similar a un contexto histórico, pero también con mucha mitología.
Estos son los más importantes.
Edward Kelley
Hablamos del "malo" del juego. Edward es el enemigo principal del protagonista William, es decir, su némesis, y al igual que él también viene de fuera de Japón (de ahí que lo veamos hablar en inglés al igual que William cuando el resto de personajes hablan en japonés). Él es muy hábil con la alquimia, lo que le permite infundir energía demoníaca en los cuerpos humanos y resucitar a los muertos. Su espíritu guardián se llama
Uroboros, y se dice que lleva el significado del ciclo, incluyendo la destrucción y la creación, o la muerte y el renacimiento.
Yasuke
Estamos ante otro de los personajes atípicos en un juego del Japón feudal al igual que
el protagonista William. Yasuke es un samurái de piel oscura de orígenes africanos que se enfrentará al protagonista William con armadura pesada negra y con una enorme hacha gigante entre sus manos como su arma principal. Debido a su enorme cuerpo y fuerza, sus ataques son realmente demoledores y un solo golpe de este personaje puede significar nuestra muerte. Yasuke está protegido por un espíritu guardián llamado
Atlas Bear, que encarna el violento poder de la naturaleza. Aquellos que ganan su patrocinio son bendecidos por un cuerpo robusto y una gran fuerza muscular. Se cree que sobreviven incluso las condiciones más peligrosas.
Tenkai
Monje de la secta Tenda del budismo esotérico. Percibe a su alrededor una presencia maligna que está mezclando el arte de onmyodo con la alquimia, y combinado con el mal uso del poder espiritual llamado Amrita, lo que le preocupa ya que podría tener catastróficas consecuencias. Su espíritu guardián es
Genbu que tiene forma de una tortuga gigante y una serpiente fusionada. Es adorado como la bestia sagrada que protege el norte, y simboliza el agua en la teoría de las cinco líneas de ley. Su aspecto de un híbrido entre serpiente y tortuga simboliza la unión de yin y yang, y está fuertemente conectado con onmyodo.
Fuku
La maestra onmyodo. También controla los secretos de la alquimia y puede controlar libremente los elementos de la tierra, el agua, el viento y el fuego que pueden ser vistos como un cuadrante. Fuku tiene poder sobre un demonio llamado Shikigami al que puede invocar y hacer que luche con ella, pero a diferencia de Edward decide ayudar a William en el camino de omnyodo.
Yagyu Sekishusai
Un monje procedente de las tierras de Yamato que ha estudiado el camino de la espada con gran dedicación, siguiendo un entrenamiento estricto que incluye enfrentamientos contra los tengu por las noches. Como resultado, se dice que ha dominado la misteriosa técnica de la espada para desafiar a los combatientes armados con las manos vacías, quitando sus propias armas para derrotarlos.
Hozoin In'ei
Monje budista perteneciente al templo de Kofukuji en las tierras de Yamato. Un día, mientras se entrenaba, se inspiraba en la forma de la luna creciente reflejada en la superficie del agua. Como consecuencia, creó la técnica de la lanza Jumonji, utilizando una lanza en forma de cruz con dos cuchillas de hoz a la izquierda y derecha de la hoja principal. Es una técnica muy diferente de la que se había utilizado en la batalla antes de entonces.